Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的步骤中逐渐扩展

从第一次显现出来去甲化脓性重排到显现出来1改型心血管疾病外科副作用的困难重重率在成人时期就有很好的描绘出，多个去甲化脓性重排无症状的成人中都有70%在血清转化后10年中都患上心血管疾病，而随访15年的成人这一比重减多于到84%。相较于之下，占去外科1改型心血管疾病一半以上的改型1改型心血管疾病的肺癌选择性还不能取得不够进一步的数据统计分析。

愈加多的人开始采用分阶段系统来定义1改型心血管疾病的困难重重：幼体在显现出来多种去甲化脓性重排时重回第1阶段，显现出来血糖异常时重回第2阶段，显现出来副作用时重回第3阶段。一些多发去甲化脓性重排无症状的幼体，在1期和2期，困难重重较迟，并持续发展为肺癌的1改型心血管疾病。我们此前描绘出了一小组在首次验证到多种去甲化脓性重排抽取后至多于10年无心血管疾病的极快困难重重者，这小组病症多人多于，但形态非常说明。随后，我们发现去甲自身特异性专一性CD8+T蛋白重排在困难重重很迟的病症中都基本不实际上，但在全面性肺癌和一直实际上的心血管疾病病症中都很容易验证到。这可能指出，与困难重重病症相较于，这些病症化脓性重排的调控增强。

早期数据统计分析指出，尽管调控性T蛋白(Treg)数量情况下，但心血管疾病病症实际上一些功能性缺陷，其中都包括对IL-2的重排潜能减缓。此外，心血管疾病病症中都的振荡CD4+T蛋白可能对调控不够具抵抗性，体现为振荡T蛋白的依赖性移向，自然转化成的Treg和体外转化成的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T蛋白中都IL-2重排移向。本数据统计分析的用以是描绘出了CD4+调控性T蛋白(Treg)在一小群极很迟困难重重者中都的形态，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方式：BOX数据统计分析是一项以成年人为了将的横向数据统计分析，在21岁表列出确诊的病症亲人中都检查1改型心血管疾病的可怕因素。我们此前描绘出了一直很迟困难重重者的形态，他们保持多重去甲化脓性重排无症状超过10年，但不能显现出来心血管疾病的外科副作用，迟性或非展开性化脓性。随后，10名继续保持无心血管疾病并愿意提供大量血液抽取的很迟困难重重者纳入T和B蛋白功能性统计分析。在现在的数据统计分析中都，8名迟困难重重者(SP小组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲化脓性重排无症状。所有的大多数人都处于1改型心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了去甲化脓性重排对某些特异性的无症状重排，然而，一名病症已经处于2期至多于6年，但不能显现出来外科副作用，一名病症被诊断为心血管疾病，该测试者72岁，在野外实验二楼抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该供体展开了单独评估。分离外周血单个质子蛋白(PBMCs)，改用多参数流式蛋白妖术和T蛋白依赖性试验中评估供体中都Treg的频率、表改型和功能性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)展开无监督聚类统计分析，评估Treg表改型。

结果：与肥胖供体相较于，来自迟困难重重体的无意识CD4+T蛋白的监督聚类结果显示，转发的无意识CD4+ Treg频率减多于，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)强调减多于有关。一名HbA1c升高的病症与困难重重很迟者和匹配的非常多于相较于，Treg明人有所相异。功能性统计分析指出，与肥胖供体相较于，来自很迟困难重重体的Treg酪氨酸的CD4+振荡T蛋白依赖性相比损伤。体现为对振荡CD4+T蛋白CD25和CD134强调的依赖性减多于。

绘出1 有系统的表改型统计分析结果显示，CD4+Treg亚改型在迟困难重重队列中都减多于。由FlowSOM生成的Treg二楼，周围在来自所有供体的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标上物强调认定出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)采用9个相异Treg标上生成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个战斗群(100个战斗群)，不够大的元战斗群(10个元战斗群)在数据流小组周围成品。每个数据流中都的糕点绘出说明单个标上的强调级别。(b)每个元聚类的热绘出，以结果显示整体标上强调。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较原孙子量为每个metacluster盒中央线绘出(原孙子量> 0.05%)确定为HD和SP小组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。深蓝色格孙子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 采用CITRUS的预测模改型证实，Treg频率的减多于是困难重重很迟的标志。基准去极化(a - f)和柑橘统计分析(g-k)相当SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调展开分离，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及供体SP 606(深蓝色)中都CD25+ cd127的频率概要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化邻域的盒中央线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调低压着色，箭头显眼的簇被识别为SP和HD队列之间的相异。(j)盒中央线绘出结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组中都，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相较原孙子量(比重)。(k)直方绘出结果显示每个簇的表改型(粉红色)和Treg标上相较强调与剧中都强调(粉红色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。剧中都与所有其他簇中都标上的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

绘出3 与肥胖献血者相较于，困难重重很迟者无意识treg的GITR减多于。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个强调标上的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中都所有HD(黄褐色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR强调相联，结果显示直方绘出(c)和概要绘出(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有供体包括，p< 0.05(粉红色)供体SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR强调，从基准去极化，从所有HD(黄褐色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深蓝色)相联，结果显示直方绘出(e)和概要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

绘出4 来自很迟困难重重的CD4+ treg蛋白操控振荡CD4+T蛋白的潜能减缓。SP小组用粉红色的中央线和格孙子说明，HD小组用黑色的中央线和格孙子说明，深蓝色的中央线/格孙子说明供体sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生蛋白，人才培养3翌日展开流式蛋白妖术验证。(a-d)与CD4+转发者相较应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。采用无症状折衷(转发的响应蛋白不含treg)计算依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

绘出5 振荡CD4+T蛋白对很迟困难重重的T蛋白再生的依赖性不够敏感。SP小组用粉红色的中央线和格孙子说明，HD小组用黑色的中央线和格孙子说明，深蓝色的中央线/格孙子说明供体sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生蛋白，人才培养3翌日展开流式蛋白妖术(CD25反染)和蛋白因孙子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE依赖性百份(b)。(c,d) CD25依赖性百份(c)和CD134依赖性百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中都的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们断定的结论是，来自很迟困难重重孙子的再生无意识CD4+Treg在GITR强调中都取得了扩展和丰富，强调了进一步数据统计分析Treg在1改型心血管疾病风险幼体中都的异质性的不足之处。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28