Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较快的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现胰脏自身抗原到经常出现1标准型哮喘流行病学病征的的蓬勃发展率在成人时期就有不太好的阐述，多个胰脏自身抗原特征性的成人里面有70%在血清转换成后10将近入院哮喘，而随访15年的成人这一比率增高到84%。相比之下之下，占流行病学1标准型哮喘一半以上的标准型1标准型哮喘的发作机制还从未得到合理的学奥义研究。

日渐多的人开始适用再行控制系统来定义1标准型哮喘的的蓬勃发展：母躯在经常出现多种胰脏自身抗原时重回第1前期，经常出现躯温诱发时重回第2前期，经常出现病征时重回第3前期。一些多发胰脏自身抗原特征性的母躯，在1期和2期，的蓬勃发展较慢，并蓬勃发展为发作的1标准型哮喘。我们之前阐述了三两组在首次检验到多种胰脏自身抗原样品后仅仅10年无哮喘的以致于慢的蓬勃发展者，这两组病变数目极少，但特征颇为明确。随后，我们发现胰脏自身抗原抗原CD8+T巨噬细胞反其所在的蓬勃发展比较慢的病变里面基本不长期存在，但在现阶段发作和值得注意的哮喘病变里面很容易检验到。这意味著确实，与的蓬勃发展病变相比之下，这些病变自身免疫反其所的调控提升。

早期学奥义研究确实，尽管调控性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但哮喘病变长期存在一些新功能缺陷，其里面仅限于对IL-2的反其所能力降低。此外，哮喘病变里面的效其所CD4+T巨噬细胞意味著对调控兼具抵抗性，表现为效其所T巨噬细胞的诱发向西移动，自然造成了的Treg和胃造成了的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞里面IL-2反其所向西移动。本学奥义研究的目标是阐述了CD4+调控性T巨噬细胞(Treg)在一小群以致于比较慢的蓬勃发展者里面的特征，他们的平均年龄两组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学奥义研究是一项以人群为基础的侧向学奥义研究，在21岁表列确诊的病变亲属里面检查1标准型哮喘的危险因素。我们之前阐述了长期以来比较慢的蓬勃发展者的特征，他们保持多重胰脏自身抗原特征性超过10年，但从未经常出现哮喘的流行病学病征，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名再次保持无哮喘并愿意提供大量肠道样品的比较慢的蓬勃发展者纳入T和B巨噬细胞新功能控制系统性。在现阶段的学奥义研究里面，8名慢的蓬勃发展者(SP两组)，里面位年龄两组43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身抗原特征性。所有的与会者都受制于1标准型哮喘的蓬勃发展的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗原对某些抗原的特征性反其所，然而，一名病变已经受制于2期仅仅6年，但从未经常出现流行病学病征，一名病变被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在控制系统性里面对该丝氨酸开展了实质上检验。分开外周血单个核分裂巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞诱发检验检验丝氨酸里面Treg的频率、表标准型和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和紧接)开展无监督聚类控制系统性，检验Treg表标准型。

结果：与心理健康丝氨酸相比之下，来自慢的蓬勃发展躯的无意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类揭示，作用于的无意识CD4+ Treg频率增高，与糖皮质激素诱发的TNFR涉及蛋白(GITR)解读增高有关。一名HbA1c上升的病变与的蓬勃发展比较慢者和匹配的对照两组相比之下，Treg对光有所不同。新功能控制系统性确实，与心理健康丝氨酸相比之下，来自比较慢的蓬勃发展躯的Treg内源性的CD4+效其所T巨噬细胞诱发明显受损。表现为对效其所CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的诱发增高。

所示1 深入的表标准型控制系统性揭示，CD4+Treg亚标准型在慢的蓬勃发展队列里面增高。由FlowSOM转换成成的Treg一楼，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物解读断定出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)适用9个不同Treg标明转换成成的10个元簇的MST。每个结点值得一提的是一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在结点两组周围上色。每个结点里面的饼所示指出单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以揭示整躯标明解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转换成成所示，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起丰度为每个metacluster箱内中央线所示(丰度> 0.05%)具躯为HD和SP两组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。粉红色左上角值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一记号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 适用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频率的增高是的蓬勃发展比较慢的红色。分级制度门控(a - f)和柑橘控制系统性(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的值得一提的是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读开展分开，演示FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及丝氨酸SP 606(粉红色)里面CD25+ cd127的频率概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控集合的箱内中央线所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度所示例，箭头突出的簇被辨别为SP和HD队列之间的不同。(j)箱内中央线所示揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比起丰度(比率)。(k)直方所示揭示每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标明比起解读与历史背景解读(黄色);上列，内核Treg_3;下面四人，内核Treg_4。历史背景与所有其他簇里面标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一记号秩检验

所示3 与心理健康献血者相比之下，的蓬勃发展比较慢者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读标明的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热所示(sp606不仅限于在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR解读串联，揭示直方所示(c)和概述所示(d)。Wilcoxon一对一记号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有丝氨酸仅限于，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不仅限于在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)串联，揭示直方所示(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一记号秩检验

所示4 来自比较慢的蓬勃发展的CD4+ treg巨噬细胞控制效其所CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP两组用黄色的中央线和左上角指出，HD两组用紫色的中央线和左上角指出，粉红色的中央线/左上角指出丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(其所答者)被标明为CFSE, Treg按通过观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，培养出来3同一天开展流式巨噬细胞奥义检验。(a-d)与CD4+其所答者比起其所的treg培养出来(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者培养出来。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE诱发总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发总和。适用特征性对照(作用于的响其所巨噬细胞都有treg)计算诱发总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差控制系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 效其所CD4+T巨噬细胞对比较慢的蓬勃发展的T巨噬细胞酪氨酸的诱发更引人注意。SP两组用黄色的中央线和左上角指出，HD两组用紫色的中央线和左上角指出，粉红色的中央线/左上角指出丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel标明，treg按通过观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，培养出来3同一天开展流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬细胞因姪控制系统性。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者共同培养出来。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE诱发花红(b)。(c,d) CD25诱发花红(c)和CD134诱发花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差控制系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们计算出来的正确性是，来自比较慢的蓬勃发展姪的酪氨酸无意识CD4+Treg在GITR解读里面得到了扩展和丰富，强调了进一步学奥义研究Treg在1标准型哮喘风险母躯里面的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28